একবার কোষ বিচ্ছিন্ন হয়ে গেলে ট্রিপসিন নিষ্ক্রিয় করতে 2 ভলিউম প্রি-ওয়ার্মড কমপ্লিট গ্রোথ মিডিয়া যোগ করুন। >95% কোষের পুনরুদ্ধার নিশ্চিত করতে সেল স্তরের পৃষ্ঠের উপর কয়েকবার পিপেটিং করে মাধ্যমটিকে আলতো করে ছড়িয়ে দিন।
আমি কিভাবে ট্রিপসিন কার্যকলাপ বন্ধ করব?
ফ্রিজিং দ্বারা ট্রিপসিনের পরিপাক বন্ধ করা যেতে পারে অথবা pH 4 এর নিচে বিক্রিয়ার pH কমিয়ে ফর্মিক, অ্যাসিটিক বা ট্রাইফ্লুরোঅ্যাসেটিক অ্যাসিড যোগ করে (ট্রাইপসিন সক্রিয়তা ফিরে পাবে যখন pH pH 4 এর উপরে উত্থিত হয়)। হজমকৃত নমুনাগুলি -20 ডিগ্রি সেলসিয়াসে সংরক্ষণ করা যেতে পারে।
কী ট্রিপসিনকে নিরপেক্ষ করে?
একটি বাফার ক্যালসিয়াম এবং ম্যাগনেসিয়াম আয়ন ধারণকারীএছাড়াও ট্রিপসিনের কার্যকলাপকে ধীর করে দেবে। তবে FBS হল ট্রিপসিন কার্যকলাপকে বাধা দেওয়ার আরও কার্যকর উপায়৷
সিরাম কি ট্রিপসিনকে নিষ্ক্রিয় করে?
সিরাম কিডনির এনজাইমেটিক হজম থেকে অবশিষ্ট অবশিষ্ট ট্রিপসিনকে নিষ্ক্রিয় করে এবং পরবর্তীকালে কোষ দ্বারা সংশ্লেষিত প্রোটিওলাইটিক এনজাইমগুলিকে নিষ্ক্রিয় করে। তাজা ট্রিপসিনাইজড কোষগুলিকে সিরামের অনুপস্থিতিতে মনোলেয়ারে বৃদ্ধি করা যেতে পারে তবে অবশিষ্ট ট্রিপসিন অপসারণের জন্য বারবার ধুয়ে ফেলা হয়।
ট্রিপসিন নিষ্ক্রিয় করতে কতটা মিডিয়া লাগে?
যতক্ষণ আপনি অন্তত 1:1 অনুপাত 5-10% সিরাম- আপনার ট্রিপসিনের সাথে থাকা মাধ্যম ব্যবহার করছেন ততক্ষণ পর্যাপ্ত বাধার চেয়ে বেশি হওয়া উচিত, তার পরে সেন্ট্রিফিউগেশন এবং তাজা মাধ্যমে মাঝারি বিনিময়।
