প্রথমত, EcoR1 এবং Xba1 উভয়ই ডিএনএ হজম করার সময় 5' ওভারহ্যাং ছেড়ে যায় (যেমন Nde1 করে)। উভয় ক্ষেত্রেই 3' প্রান্তটি পুনরুদ্ধার করা হয় যার কারণে পলিয়ারমেজ বেস যোগ করতে পারে। দ্বিতীয়ত, সমস্ত পলিমারেজ শুধুমাত্র একটি 3' প্রান্তে ঘাঁটি যুক্ত করতে পারে, তাই ক্লেনো ভোঁতা প্রান্ত তৈরি করতে উভয় সাইটের শেষ 3' প্রান্তে 4টি ঘাঁটি যুক্ত করবে।
সীমাবদ্ধ এনজাইমগুলি কি 5 ফসফেট ছেড়ে যায়?
নিষেধ এনজাইম দ্বারা পরিপাককৃত ভেক্টর এবং সন্নিবেশে প্রয়োজনীয় টার্মিনাল পরিবর্তন (5' ফসফেট এবং 3' হাইড্রক্সিল) থাকে, যখন পলিমারেজ চেইন রিঅ্যাকশন (পিসিআর) দ্বারা সৃষ্ট খন্ডগুলি নাও থাকতে পারে।
ভোঁতা প্রান্ত বন্ধ করা যেতে পারে?
ব্লান্ট-এন্ড লাইগেশন
ব্লান্ট এন্ড লাইগেশনে প্রসারিত প্রান্তের বেস-পেয়ারিং জড়িত নয়, তাই যেকোন ভোঁতা প্রান্ত অন্য ভোঁতা প্রান্তের সাথে আটকে থাকতে পারে। SmaI এবং EcoRV-এর মতো সীমাবদ্ধ এনজাইম দ্বারা ব্লন্ট এন্ড তৈরি হতে পারে।
Taq পলিমারেজ কি ভোঁতা শেষ তৈরি করে?
হ্যাঁ… আপনি যদি PCR-তে চূড়ান্ত এক্সটেনশন ধাপ 72 dC রাখেন তাহলে Taq পলিমারেজ A-Overhangs যোগ করে। টিএ ক্লোনিং এর জন্য বেশিরভাগই ব্যবহৃত হয়।
ডিএনএ সিকোয়েন্সিংয়ে ক্লেনো ফ্র্যাগমেন্ট কেন ব্যবহার করবেন?
ক্লেনো ফ্র্যাগমেন্টটি গবেষণা-ভিত্তিক কাজের জন্য অত্যন্ত উপযোগী যেমন: একক-স্ট্র্যান্ডেড টেমপ্লেট থেকে ডবল-স্ট্র্যান্ডেড ডিএনএ সংশ্লেষণ । 5' ওভারহ্যাং ব্লান্ট করতে ডিএনএ টুকরোগুলির 3' প্রান্তে ভরাট করা হচ্ছে । 3' ওভারহ্যাংগুলি হজম করা ।
